引言:分枝杆菌属( Mycobacterium)是一类细长略弯曲的杆菌,因有分枝生长的趋势而得名。细胞壁含有大量脂质,主要是分枝菌酸,一般不易着色,若经加温或延长染色时间而着色后能抵抗强脱色剂盐酸乙醇的脱色,故又称抗酸杆菌,且不易破壁。本次实验ATS破壁机将样品做两部分处理,对比破壁结果。
实验对象
胞内分枝杆菌
实验仪器
高速离心机
ATS破壁机
显微镜
实验背景
分枝杆菌属( Mycobacterium)是一类细长略弯曲的杆菌,因有分枝生长的趋势而得名。本菌属的显著特性为:①细胞壁含有大量脂质;②无鞭毛、无芽胞,也不产生内、外毒素;③对人致病的主要有结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、麻风分枝杆菌;④所致感染多为慢性过程,长期迁延并有破坏性的组织病变。
实验难点
细胞壁含有大量脂质,主要是分枝菌酸,一般不易着色,若经加温或延长染色时间而着色后能抵抗强脱色剂盐酸乙醇的脱色,故又称抗酸杆菌,且不易破壁。
实验目的
将胞内分枝杆菌进行破壁,后续提取蛋白。
实验工艺
1.预处理:将灭活后的胞内分枝杆菌液体(非结核)分为两部分,一部分不作处理;一部分做碱处理,离心后去上清加水再重悬。
2.实验工艺:ATS破壁机搭配一级模块后,控低温处理。
实验结果
A.未处理的菌液破壁结果
通过对菌液进行抗酸染色后观察,破壁前菌液呈紫色,在破壁次数相同的条件下,随着压力的增高,胞内分枝杆菌颜色偏向蓝色。
100倍油镜显示,压力越高,破壁效果越好。(压力排序:A<B<C<D)
破壁前
破壁后
B.碱处理菌液破壁结果
同压力同次数下,碱处理后的菌液破壁效果明显提高。
(碱处理) (未处理)
实验小结
1.从染色结果和显微镜观察结果可以看出,未处理的菌液经不同压力处理后,都有一定程度的细菌破壁,且压力越高,破壁效果越好。
2.碱处理有助于破壁,比同压力未处理的菌液破壁结果更好,细胞更细碎。
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